Главная

• Антитела
• Реакция антиген-антитело
• Клетки иммунной системы
• История иммунологии
• Иммунохимия
• Продукты на страже иммунитета
• Вакцины
• Общие и частные проблемы иммунологии
• Основы иммунологии

Радиоиммунологический анализ. Оценка метода

Радиоиммунологический анализ прочно вошел в арсенал современных лабораторных клинических исследований. Обилие методических вариантов свидетельствует о том, что не всегда можно придерживаться одной схемы и что следует учитывать качество реагентов. Методы, основанные на использовании твердой фазы (пластмасса, целлюлоза, сефадекс), привели к существенному упрощению процесса. За исключением счетчика, метод не требует сложного оборудования. Процедуры, занимающие длительное время (отбор проб, отмывание и измерение радиоактивности), могут быть автоматизированы. Колебания в серии измерений (n = 5) не превышают, как правило, 10%. Перекрестная реактивность антител вследствие фиксации на твердой фазе не претерпевает существенных изменений. Адсорбция сывороточных белков приводит к тому, что те из них, которые обладали ингибирующей или протеолитической активностью, оказываются не в состоянии влиять на результаты анализа.

Метод двойных антител, при котором происходит отделение ИК за счет второй сыворотки, обладает очень высокой воспроизводимостью, но требует много времени (3—7 дней). К числу преимуществ данной методики относится небольшой расход сыворотки на одно исследование. Это обстоятельство может иметь важное значение при работе со слабо иммуногенными веществами, для которых получение АС представляет известные трудности. Обе основные реакции различаются по тому, в какой области концентраций они происходят: конкурентная реакция протекает при концентрациях порядка нанограммов вещества, преципитация — микрограммов вещества.

Возможные ошибки во вторичной реакции можно уменьшить, используя очищенные фракции γ-глобулина или предварительное прогревание. Еще одним способом, которым можно избежать неспецифические реакции, является использование препреципитирующих антител или присоединение вторичной сыворотки к твердой фазе (целлюлоза). Однозначно судить о преимуществах радиоиммунологического анализа или метода двойных антител нельзя. На примере определения хорионического гонадотропина видно, что присоединение антител к твердой фазе бромциановым методом приводит к заметному снижению их специфической иммунореактивности, что означает также снижение чувствительнеости.

Сравнение метода двойных антител и двух твердофазных методов в отношении определения IgE свидетельствует о том, что с нормальными сыворотками первый дает заниженные результаты, а в случае патологии результаты, получаемые всеми тремя методами, совпадают. Метод двойных антител обладает несомненными преимуществами перед методом преципитации сульфатом аммония. После конъюгации активность антител к гормонам с высокой относительной молекулярной массой (6000—26000) снижалась на 10—15% с параллельным уменьшением чувствительности. Эти различия, вероятно, обусловлены различной степенью доступности связанных антител для антигенов.

Метод Фарра занимает достаточно прочные позиции в клинической диагностике, по крайней мере в отношении определения антител к ДНК и РНК. К тому же остаются нерешенными вопросы стандартизации антигенов и неспецифического связывания. Важным преимуществом метода Фарра является то, что используются различные связывающие и преципитирующие антител. радиоиммунологический анализ с использованием меченых антител находит применение для определения веществ, присутствующих в количествах, измеряемых пикограммами, таких как специфические IgE-антитела и некоторые вирусные и бактериальные антигены. Особенно выгодно использовать данную модификацию, когда имеются трудности с мечением антигенов. При этом преодолеваются сложности с антигенами, которые по своей иммунореактивности отличаются от меченых стандартных антигенов. Взаимодействие меченого антител с другим антител (в качестве антигенов) приводит к амплификации данных измерений. Определение содержания тех или иных веществ на основе реакции антиген-антитело не дает непосредственной корреляции с их биологической активностью. Для подтверждения заключений на основе радиоиммунологического анализа требуется дополнительная биопроба.

Использование антител в качестве первичного связывающего агента позволяет обойти это ограничение. До настоящего времени в клинике используют анализ пептидов, стероидных гормонов, гликопротеидов при помощи радиолигандов и клеточных рецепторов. Можно получать стандартизованные по сравнению с антисыворотками препараты антител, но они не отличаются достаточной стойкостью. Особенности радиоиммунологической техники, такие как необходимость защиты от излучения, ограниченное время жизни реагентов, привели к поиску альтернативных методов маркировки. Было описано применение бактериофагов, флюорохромов, ферментов, твердофазных частиц и даже атомов металлов в качестве маркеров. Но все эти методы пока не могут вытеснить радиоиммунологические методы иследования.